Количественный и качественный пцр гепатит с

Пцр на гепатит с: качественный и количественный анализ рнк вируса

Количественный и качественный пцр гепатит с

Полимеразная цепная реакция, а попросту ПЦР на гепатит С — современная методика диагностики вирусного воспаления печени. У болезни есть разновидности. Известны, к примеру, инфекции А и В типов.

Их симптоматика явная. Гепатит С, напротив, протекает скрытно, даже на острой стадии развития. ПЦР — надёжный способ ранней диагностики. Анализ позволяет подтвердить присутствие вируса в организме.

История применения полимеразной цепной реакции

Анализ ПЦР на гепатит стал общепринятым, стандартизированным в конце прошлого века.

До этого пройдены следующие этапы развития полимеразной диагностики:

  1. В 1970-х годах Хьелль Клеппе из Норвегии стал проводить эксперименты по увеличению фрагментов ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты). Её учёный удлинял при помощи праймеров. Так называют искусственные короткие нуклеиновые кислоты. Ввиду недостаточной изученности и неполной расшифровки строения ДНК, опыты Клеппе «не вышли» из стен лаборатории.
  2. В 1985 году в американском научном журнале появилась статья Кэри Мулисса. Он описал принципы проведения анализа с помощью многократного удвоения фрагментов исходного ДНК. В итоге Кэри Мулисса удостоили Нобелевской премии. Учёный получил её в 1993 году.
  3. Первоначально исследование проводилось при постоянном добавлении ДНК-полимеразы. Требовался нагрев. Высокие температуры распрямлялицепь ДНК. При этом полимераза инактивировалась, то есть становилась неактивной в реакции. Поэтому первая версия ПЦР была малоэффективной, требовала много времени и материалов.
  4. В 1986 году процедуру проведения анализа изменили. Стали использовать ДНК-полимеразу, полученную из термофильных бактерий. Такой материал устойчив к высоким температурам. Уменьшилось время проведения анализа, повысилась его точность и появилась возможность автоматизировать процесс.

Первоначально метод был запатентован. Права принадлежали компании «Хофман-Ла Рош». С 90-х годов прошлого века проведено несколько судов. К 2005 году истцамудалось заставить «Хофман-Ла Рош» отказаться от патента. Так ПЦР стала доступна для всех.



Суть анализа и механизм его проведения

В общих словах ПЦР — многократное копирование участков ДНК или РНК (рибонуклеиновой кислоты). «Размножают» заранее определённый фрагмент.

Для проведения исследования требуются:

  • предназначенный для репликации характерный участок РНК гепатита С;
  • два типа синтетического праймера;
  • катализатор реакции, коим служит ДНК-полимераза;
  • буферный раствор;
  • ионы магния;
  • высококипящее масло.

Во время анализа на выявление возбудителя гепатитаили других инфекционных заболеваний проводят 20-35 циклов.

В каждом из них последовательно повторяется 3 операции:

  1. Вначале материал возбудителя нагревают минимум до 90 градусов. В это время цепочки ДНК начинают разворачиваться.
  2. Следующая операция — отжиг, проводится при температуре 60-72 градуса. В этих условиях начинают работать праймеры.
  3. На заключительном этапе добавляется ДНК-полимераза, которая реплицирует матричную цепь.

Каждая операция длится определённое время. Денатурация или нагрев проводится на протяжении минимум 2 минут. Самая короткая операция отжига выполняется за 30 секунд. Последняя стадия самая длительная, может занять 7—10 минут.

Виды ПЦР

С помощью ПЦР на гепатит выявляют возбудителя вирусного воспаления печени. Однако анализ востребован и при выявлении отцовства. Также исследование используется в криминалистике.

Если предстоит диагностика гепатита С, врачи используют несколько разновидностей анализа ПЦР:

  1. Качественный анализ на гепатит. Исследование показывает наличие или отсутствие вируса в крови. У качественного исследования есть настройки чувствительности. Если патогена в крови менее 10МЕ (международных единиц) на миллилитр, результат исследования отрицательный. Верхняя граница чувствительности равна 500 МЕ на миллилитр.
  2. Гепатит С количественный анализ. Его ещё называют исследованием на определение вирусной нагрузки. Определяют число РНК вируса гепатита C. Количественный анализ тоже проводится на 1 миллилитре крови пациента.

Качественный анализ проводится перед-, либо во время лечения. С помощью исследования врачи находят ответ на 3 вопроса. Во-первых, определяется степень риска передачи возбудителя от больного человека здоровому. Во-вторых, проверяется эффективность проводимого лечения. Третий ответ, «вытекающий» из результатов ПЦР — время, необходимое для терапии гепатита С.

Определяет ли ПЦР генотип и квазитип вируса

Вирусам свойственно быстро мутировать. Возбудитель гепатита С — рекордсмен среди них. Пытаясь остаться незамеченным иммунной системой человека, патоген меняет генетический набор. Его вариаций у гепатита С 11. Официально признаны 6. Прочие Всемирная Организация Здравоохранения не фиксирует, поскольку ещё не выявлены возбудители.

У каждой разновидности гепатита С имеются подвиды. Их именуют квазитипами. Первичные же вариации называются генотипами.

Для успешной борьбы с гепатитом С важно знать, какой именно генотип вируса попал в организм. В каждом конкретном случае применяются разные методики лечения.

Анализ ПЦР гепатита С даёт информацию о генотипе патогена, но не в 100% случаев. Если вирусная нагрузка низкая, определить разновидность возбудителя сложно.

Каждая разновидность вируса распространена в определённых географических зонах, а именно:

  • тип 1 в чаще встречается в государствах бывшего Советского Союза;
  • тип 2 чаще встречается в Европе и Северной Америке;
  • генотипы 5 и 6 редкие, характерны только для некоторых африканских и азиатских стран.

Исследование ПЦР в лабораториях направлено на выявление типов, распространённых в конкретном государстве. Поэтому порой выдаётся результат «не типируется». В этом случае, а также при низкой вирусной нагрузке, желательно пройти повторное исследование в лабораториях с более чувствительной аппаратурой.

Когда проводят ПЦР

К каждому медицинскому исследованию должны быть показания. По крайней мере, это касается обслуживания по полису обязательного медицинского страхования. Врач назначит цепную реакцию (или ПЦР) для диагностики гепатита, если имеются подозрения на воспаление печени.

К его симптомам относятся:

  1. Общая слабость. Пациент быстро утомляется. Слабость ощущается во всех органах и системах, постепенно нарастает.
  2. Чувство тяжести в животе. Наблюдаются болевые ощущения в области правого подреберья.
  3. Отсутствует аппетит. Пациент чувствует тошноту.
  4. Желтуха. Проявляется на острой стадии гепатита примерно у 70% больных.
  5. Сосудистые звёздочки на кожном покрове. Обычно появляются возле пупка.
  6. Боли в суставах. Напоминают ломоту при гриппе.

Качественный анализ проводят всем, при возникновении подозрений на гепатит при условии наличия должного оборудования. Количественную реакцию делают при подтверждённом диагнозе при начале лечения для определения метода терапии. Проводят анализ и во время лечения, дабы определить эффективность выбранного курса и сроки его окончания.

Подготовка к анализу

ПЦР-тест, как и любое медицинское исследование, проводится по правилам. Требования есть как к медицинским работникам, так и пациентам.

К сдаче проб нужно подготовиться:

  • перед сдачей анализа необходимо голодать 8—12 часов, поэтому исследование проводится утром;
  • неделю до посещения процедурного кабине нужно придерживать диеты, отказавшись от жирных, копчёных и солёных блюд, алкогольных напитков;
  • за неделю до ПЦР прекратить курить;
  • за сутки до сдачи проб нельзя проходить рентген, флюорографию, ультразвуковое исследование;
  • пациентки во время менструации не проходят анализ ПЦР на гепатит С,в связи активной гормональной перестройкой.

Приём некоторых медикаментов может повлиять на результаты анализа. Поэтому за неделю до ПЦР стоит отказаться от лекарств, а если это невозможно, сообщить о принимаемых средствах врачу.

Повлиять на результаты ПЦР могут также любые заболевания, в острой или хронической форме. Поэтому об известных диагнозах тоже сообщается доктору.

Расшифровка результатов анализа

Когда врачи расшифровывают результаты ПЦР, они определяют отклонения от нормы, получают данные о типе вируса.

Лаборатория выдаёт бланк, в котором указывается следующая информация:

  1. Обнаружен или нет вирус. Как правило, пишется «найдено» и «не найдено». Если речь идёт о качественном анализе ПЦР, это единственные данные на бланке.
  2. При количественном исследовании указывается уровень вирусной нагрузки. Прописывается число РНК-фракций на один миллилитр крови. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита — более 800 тысяч МЕ.
  3. В результатах анализа указывается генотип вируса гепатита С. Если определить подвид патогена не получилось, выдаётся результат «не типируется».
  4. Указывается в бланке и название проведённого теста.

В некоторых лабораториях расшифровку дополняют другой информацией. Это зависит от оснащённости учреждения, его специализации.

Стоимость ПЦР

На анализ крови ПЦР цена определяется множеством факторов:

  • престижностью лаборатории;
  • характером учреждения – в государственных клиниках за анализ берут меньше, нежели в частных;
  • сложностью исследования, так, количественный анализ дороже качественного.

Цена анализа ПЦР на вирус гепатита С варьируется в пределах от 400 до 11 тысяч рублей.

Исследование сложное, поэтому не стоит забывать о сроках. Обычно результаты анализа ждут от нескольких часов, до восьми дней. Скорость, как правило, зависит от объёма проделываемой лаборантами работы, типа аппаратуры. На изношенной и устаревшей технике в некоторых государственных клиниках анализ делают дольше.

Источник: https://gepatit.su/diagnostika/ptsr-analiz

Пцр гепатит с качественный и количественный

Количественный и качественный пцр гепатит с

Гепатит С — вирусное заболевание печени, вызываемое флавивирусом HCV (от англ. hepatitis C virus), в структуре которого содержится молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК). РНК несет генетический код вируса. Ее наличие позволяет проводить анализ ПЦР на гепатит С.

Опасность HCV для человека заключается и в том, что так называемое серологическое окно (промежуток времени между заражением и появлением реакции со стороны иммунной системы) может быть достаточно длительным — от нескольких недель до шести месяцев.

Это не дает обнаружить инфицирование и начать лечение вовремя.

В зависимости от индивидуальных особенностей организма носителя HCV может проявляться в острой форме, а также протекать как хроническое заболевание, которое потребует длительного и дорогостоящего лечения. При выявлении антител к HCV проводится ряд лабораторных анализов, в том числе ПЦР на гепатит С. Этот тест делается всем людям, в чьей крови были найдены антитела к HCV.

Что такое анализ ПЦР?

Лабораторный анализ ПЦР на гепатит С — исследование биологического материала с целью выявить наличие флававируса.

Полимеразная цепная реакция (так расшифровывается аббревиатура) показывает количественное значение вирусного поражения организма, его качественные характеристики, а также генотип вируса, содержащего РНК.

На их основе, а также на базе дополнительных анализов определяется способ и длительность терапии, а также эпидемиологический фактор (степень риска передачи другому носителю).

Что такое РНК-анализ на гепатит С?

ПЦР гепатита С еще называют РНК-анализом (HCV RNA), т.к. флававирус содержит в себе частицу РНК размером вириона 30-60 нм. Одной из особенностей этого микроорганизма является высокая склонность к мутациям.

Каждый из подвидов (генотипов) вируса имеет различную резистентность, что обуславливает разные методики лечения и характер дальнейшего прогноза для пациента.

Биологический материал (венозная кровь) сдается натощак и, как правило, тестируется методом Real-Time PCR (высокочувствительной диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с применением закрытых автоматизированных систем).

Существуют другие тесты, например COBAS AMPLICOR с сенситивностью 50-100 МЕ/мл. Для любого лабораторного исследования важен порог чувствительности, т.е. способности реагента выявить минимальную концентрацию вируса в биологическом материале.

Референсное значение теста (нормальные показатели) — «не найдено».

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:

  • качественный анализ;
  • количественный анализ;
  • генотипирование.

Actionteaser.ru – тизерная реклама

Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.

Качественный ПЦР гепатита С

Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.

Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.

Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента.

Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.

Количественный ПЦР гепатита С

ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме.

Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови.

Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:

  • инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
  • метод и эффективность лечения;
  • длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).

Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.

Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.

Генотипирование

Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов). На территории РФ распространены 1,2 и 3.

ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.

Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии. Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.

Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.

Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип.

В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой.

Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.

Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С

Тест на гепатит С ПЦР количественный расшифровать можно на основе приведенных выше данных. При получении результатов лабораторных анализов обычно пишутся следующие данные:

  • «найдено»/ «не найдено» (ПЦР качественный на гепатит С);
  • количество РНК-содержащих фракций, например 831.680 ME/мл (анализ на ПЦР количественный);
  • цифра, определяющая генотип HCV, например — 1, 2, 3, 4;
  • название теста — чаще всего Real-time.

Наиболее важным при расшифровке анализа ПЦР на гепатит С считается второй пункт, который показывает вирусную нагрузку, определяющую прогноз, способ и длительность лечения.

Важно: в результате теста рядом с цифрой, показывающей генотип, может стоять латинская буква, например, 1а, что обозначает субтип вируса. Для врача он не имеет значения: для выбора метода лечения берется только генотип.

Если ПЦР анализ на гепатит С отрицательный, а ИФА положительный — что это значит?

Для расшифровки лабораторных анализов важно обратиться к гепатологу или инфекционисту, который разъяснит полученную информацию в соответствии с видом диагностической системы и порогом ее чувствительности. В медицинской практике существует множество данных анализов крови, которые могут ввести человека без медицинского образования в заблуждение.

Например, если тест на гепатит С ПЦР отрицательный, а ИФА положительный, то может обозначать, что в данный момент в крови пациента нет HCV, но ранее он перенес острую форму гепатита С.

 Принято считать, что позитивный иммуноферментный анализ (ИФА) показывает, что в крови есть антитела, выработанные после вторжения вируса в прошлом.

Но в современной медицинской практике ИФА анализ считается недостаточно надежным и нередко дает нетипичные результаты, поэтому врачи используют его в качестве первичного скрининга. При диагностике заболевания специалисты ориентируются именно на ПЦР тесты.

В следующем видео очень подробно и интересно рассказывается, в чем суть метода ПЦР, как проводится анализ:

Заключение

Для анализа на ПЦР гепатита С обычно берется венозная кровь. Чаще всего происходит двойной забор биологического материала — для ИФА, и непосредственно для ПЦР теста. Для корректных результатов тестов требуется соблюдение основных правил лабораторного забора биологического материала:

  • кровь на анализ сдается в первой половине дня натощак;
  • между приемом пищи и забором крови должно пройти не менее 8 часов;
  • перед сдачей анализа нужно также исключить алкоголь и жареную пищу;
  • в течение суток перед сдачей крови необходимо избегать высоких физических нагрузок.

Результаты тестирования крови обычно готовы на следующий день.

Источник: https://gepasoft.su/pcr-gepatit-s-kachestvennyj-i-kolichestvennyj/

Пцр количественный гепатит с

Количественный и качественный пцр гепатит с

Гепатит С — вирусное заболевание печени, вызываемое флавивирусом HCV (от англ. hepatitis C virus), в структуре которого содержится молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК). РНК несет генетический код вируса. Ее наличие позволяет проводить анализ ПЦР на гепатит С.

Опасность HCV для человека заключается и в том, что так называемое серологическое окно (промежуток времени между заражением и появлением реакции со стороны иммунной системы) может быть достаточно длительным — от нескольких недель до шести месяцев.

Это не дает обнаружить инфицирование и начать лечение вовремя.

В зависимости от индивидуальных особенностей организма носителя HCV может проявляться в острой форме, а также протекать как хроническое заболевание, которое потребует длительного и дорогостоящего лечения. При выявлении антител к HCV проводится ряд лабораторных анализов, в том числе ПЦР на гепатит С. Этот тест делается всем людям, в чьей крови были найдены антитела к HCV.

Лечим сами
Добавить комментарий